pHT43質(zhì)粒載體圖譜序列抗性說明書價格Biovector公司
- 價 格：￥3920
- 貨 號：BiovectorpHT43
- 產(chǎn) 地：北京
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- 聯(lián)系人：Dr.Xu, Biovector NTCC Inc.
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載體基本信息
| 出品公司: | MoBiTec GmbH, Germany |
|---|---|
| 載體名稱: | pHT43 |
| 質(zhì)粒類型: | 枯草芽孢桿菌表達(dá)載體 |
| 高拷貝/低拷貝: | 高拷貝 |
| 啟動子: | Pgrac |
| 克隆方法: | 多克隆位點(diǎn)，限制性內(nèi)切酶 |
| 載體大小: | 8057bp |
| 5' 測序引物及序列: | LacI-R：GGCATACTCTGCGACATCGT |
| 3' 測序引物及序列: | -- |
| 載體標(biāo)簽: | N-amyQ |
| 載體抗性: | 氨芐和氯霉素 |
| 篩選標(biāo)記: | -- |
| 備注: | pHT43載體通過IPTG誘導(dǎo)，能夠高水平分泌表達(dá)目的蛋白。 |
| 產(chǎn)品目錄號: | pBS002 |
| 穩(wěn)定性: | 瞬時表達(dá) |
| 組成型: | 誘導(dǎo)型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
載體質(zhì)粒圖譜和多克隆位點(diǎn)信息
載體簡介
1.簡介
革蘭氏陽性菌因其在農(nóng)業(yè)，醫(yī)療和食品生物技術(shù)和重組蛋白生產(chǎn)等方面的貢獻(xiàn)而廣為人知。在所有革蘭氏陽性菌中，枯草芽孢桿菌載體因下列原因尤為引人矚目。（一）無致病性，且一般認(rèn)為安全的有機(jī)體；（二）無明顯的密碼子偏好性；（三）可直接將功能性胞外蛋白分泌到培養(yǎng)基中（目前，大約60％的市售酶由芽孢桿菌生產(chǎn)）；（四）具備包含轉(zhuǎn)錄，翻譯，蛋白質(zhì)折疊、分泌機(jī)制，遺傳操作和大規(guī)模發(fā)酵的大信息量機(jī)體。
但是下述兩個障礙減少了枯草芽孢桿菌的使用：（一）產(chǎn)生一定數(shù)目的識別并降解外源蛋白的胞外蛋白酶；（二）載體質(zhì)粒穩(wěn)定性。第一個障礙已因蛋白酶缺失株的構(gòu)建而基本解決 。第二個因引入使用θ-復(fù)制模式質(zhì)粒被完全克服，如由天然質(zhì)粒pAMβ1和pBS72衍生的一些質(zhì)粒（Jannière等，1990；Titok等，2003）。
最近，基于大腸桿菌 - 枯草桿菌穿梭質(zhì)粒pMTLBS72的四種不同表達(dá)載體的構(gòu)建和使用展示出全面的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，業(yè)已出版（Nguyen等，2005）。
兩個新的載體pHT01和pHT43允許在細(xì)胞質(zhì)中高水平表達(dá)重組蛋白，其中pHT43載體引導(dǎo)重組蛋白到培養(yǎng)基。這兩個載體基于強(qiáng)σA-依賴性啟動子的枯草桿菌groE操縱子通過添加lac操縱子改造成為一種高效可控的（IPTG誘導(dǎo)的）啟動子。pHT01衍生載體可與8×His標(biāo)簽（pHT08），鏈球菌標(biāo)簽（pHT9）或C - Myc的標(biāo)簽（pHT10）相結(jié)合。
2. pHT 載體
所有在枯草芽孢桿菌的groESL操縱子之前使強(qiáng)啟動子與lac操縱子融合的載體都可通過加入IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)。盡管當(dāng)未添加誘導(dǎo)物時表達(dá)組件的背景表達(dá)水平很低，還是成功從約1300種誘導(dǎo)因子中篩選出一種來使用bgaB報道基因（Phan等，2005）。當(dāng)分別將htpG和pbpE基因融合到groE啟動子時，加入IPTG后，表達(dá)的重組蛋白可能分別占細(xì)胞總蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。熱纖梭菌的amyQα-淀粉酶和纖維素酶A、B的高水平表達(dá)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。該載體還插入了一個高效SD序列以及一個多克隆位點(diǎn)（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。編碼α-淀粉酶的amyQ基因的信號肽編碼區(qū)域與pHT01的SD序列融合，構(gòu)成了pHT43，以此獲得分泌的重組蛋白。
載體序列
LOCUS pHT43 8057 bp DNA circular 12-JAN-2014
SOURCE
ORGANISM
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COMMENT VNTAUTHORNAME|biovector.net|
BASE COUNT 2503 a 1584 c 1703 g 2267 t
ORIGIN
1 ttaagttatt ggtatgactg gttttaagcg caaaaaaagt tgctttttcg tacctattaa
61 tgtatcgttt tagaaaaccg actgtaaaaa gtacagtcgg cattatctca tattataaaa
121 gccagtcatt aggcctatct gacaattcct gaatagagtt cataaacaat cctgcatgat
181 aaccatcaca aacagaatga tgtacctgta aagatagcgg taaatatatt gaattacctt
241 tattaatgaa ttttcctgct gtaataatgg gtagaaggta attactatta ttattgatat
301 ttaagttaaa cccagtaaat gaagtccatg gaataataga aagagaaaaa gcattttcag
361 gtataggtgt tttgggaaac aatttccccg aaccattata tttctctaca tcagaaaggt
421 ataaatcata aaactctttg aagtcattct ttacaggagt ccaaatacca gagaatgttt
481 tagatacacc atcaaaaatt gtataaagtg gctctaactt atcccaataa cctaactctc
541 cgtcgctatt gtaaccagtt ctaaaagctg tatttgagtt tatcaccctt gtcactaaga
601 aaataaatgc agggtaaaat ttatatcctt cttgttttat gtttcggtat aaaacactaa
661 tatcaatttc tgtggttata ctaaaagtcg tttgttggtt caaataatga ttaaatatct
721 cttttctctt ccaattgtct aaatcaattt tattaaagtt catttgatat gcctcctaaa
781 tttttatcta aagtgaattt aggaggctta cttgtctgct ttcttcatta gaatcaatcc
841 ttttttaaaa gtcaatatta ctgtaacata aatatatatt ttaaaaatat cccactttat
901 ccaattttcg tttgttgaac taatgggtgc tttagttgaa gaataaagac cacattaaaa
961 aatgtggtct tttgtgtttt tttaaaggat ttgagcgtag cgaaaaatcc ttttctttct
1021 tatcttgata ataagggtaa ctattgccga tcgtccattc cgacagcatc gccagtcact
1081 atggcgtgct gctagcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg
1141 gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta
1201 agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaattc
1261 gagctcaggc cttaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga
1321 aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
1381 attgggcgcc agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt
1441 caccgcctgg ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg
1501 aaaatcctgt ttgatggtgg ttgacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc
1561 gtatcccact accgagatat ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat
1621 tgcgcccagc gccatctgat cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt
1681 cagcatttgc atggtttgtt gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc
1741 tatcggctga atttgattgc gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc
1801 cgagacagaa cttaatgggc ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag
1861 atgctccacg cccagtcgcg taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt
1921 ctggtcagag acatcaagaa ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat
1981 ggcatcctgg tcatccagcg gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag
2041 attgtgcacc gccgctttac aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac
2101 gctggcaccc agttgatcgg cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg
2161 cagggccaga ctggaggtgg caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg
2221 tgccacgcgg ttgggaatgt aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt
2281 tttcgcagaa acgtggctgg cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc
2341 ggcatactct gcgacatcgt ataacgttac tggtttcatc aaaatcgtct ccctccgttt
2401 gaatatttga ttgatcgtaa ccagatgaag cactctttcc actatcccta cagtgttatg
2461 gcttgaacaa tcacgaaaca ataattggta cgtacgatct ttcagccgac tcaaacatca
2521 aatcttacaa atgtagtctt tgaaagtatt acatatgtaa gatttaaatg caaccgtttt
2581 ttcggaagga aatgatgacc tcgtttccac cggaattagc ttggtaccag ctattgtaac
2641 ataatcggta cgggggtgaa aaagctaacg gaaaagggag cggaaaagaa tgatgtaagc
2701 gtgaaaaatt ttttatctta tcacttgaaa ttggaaggga gattctttat tataagaatt
2761 gtggaattgt gagcggataa caattcccaa ttaaaggagg aaggatcaat gattcaaaaa
2821 cgaaagcgga cagtttcgtt cagacttgtg cttatgtgca cgctgttatt tgtcagtttg
2881 ccgattacaa aaacatcagc cgtaggatcc tctagagtcg acgtccccgg ggcagcccgc
2941 ctaatgagcg ggcttttttc acgtcacgcg tccatggaga tctttgtctg caactgaaaa
3001 gtttatacct tacctggaac aaatggttga aacatacgag gctaatatcg gcttattagg
3061 aatagtccct gtactaataa aatcaggtgg atcagttgat cagtatattt tggacgaagc
3121 tcggaaagaa tttggagatg acttgcttaa ttccacaatt aaattaaggg aaagaataaa
3181 gcgatttgat gttcaaggaa tcacggaaga agatactcat gataaagaag ctctaaaact
3241 attcaataac cttacaatgg aattgatcga aagggtggaa ggttaatggt acgaaaatta
3301 ggggatctac ctagaaagcc acaaggcgat aggtcaagct taaagaaccc ttacatggat
3361 cttacagatt ctgaaagtaa agaaacaaca gaggttaaac aaacagaacc aaaaagaaaa
3421 aaagcattgt tgaaaacaat gaaagttgat gtttcaatcc ataataagat taaatcgctg
3481 cacgaaattc tggcagcatc cgaagggaat tcatattact tagaggatac tattgagaga
3541 gctattgata agatggttga gacattacct gagagccaaa aaacttttta tgaatatgaa
3601 ttaaaaaaaa gaaccaacaa aggctgagac agactccaaa cgagtctgtt tttttaaaaa
3661 aaatattagg agcattgaat atatattaga gaattaagaa agacatggga ataaaaatat
3721 tttaaatcca gtaaaaatat gataagatta tttcagaata tgaagaactc tgtttgtttt
3781 tgatgaaaaa acaaacaaaa aaaatccacc taacggaatc tcaatttaac taacagcggc
3841 caaactgaga agttaaattt gagaagggga aaaggcggat ttatacttgt atttaactat
3901 ctccatttta acattttatt aaaccccata caagtgaaaa tcctctttta cactgttcct
3961 ttaggtgatc gcggagggac attatgagtg aagtaaacct aaaaggaaat acagatgaat
4021 tagtgtatta tcgacagcaa accactggaa ataaaatcgc caggaagaga atcaaaaaag
4081 ggaaagaaga agtttattat gttgctgaaa cggaagagaa gatatggaca gaagagcaaa
4141 taaaaaactt ttctttagac aaatttggta cgcatatacc ttacatagaa ggtcattata
4201 caatcttaaa taattacttc tttgattttt ggggctattt tttaggtgct gaaggaattg
4261 cgctctatgc tcacctaact cgttatgcat acggcagcaa agacttttgc tttcctagtc
4321 tacaaacaat cgctaaaaaa atggacaaga ctcctgttac agttagaggc tacttgaaac
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4501 taaatggaaa ccctaatatt gaaattccag atgacgagga agcacatgta aagaaggctt
4561 taaaaaagga aaaagagggt cttccaaagg ttttgaaaaa agagcacgat gaatttgtta
4621 aaaaaatgat ggatgagtca gaaacaatta atattccaga ggccttacaa tatgacacaa
4681 tgtatgaaga tatactcagt aaaggagaaa ttcgaaaaga aatcaaaaaa caaataccta
4741 atcctacaac atcttttgag agtatatcaa tgacaactga agaggaaaaa gtcgacagta
4801 ctttaaaaag cgaaatgcaa aatcgtgtct ctaagccttc ttttgatacc tggtttaaaa
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5101 actgatttaa atttatttag actggaatta ataattaaca cgtagactaa ttaaaattta
5161 atgagggata aagaggatac aaaaatatta atttcaatcc ctattaaatt ttaacaaggg
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5281 agggttataa cactgattaa tttcttaatg ggggagggat taaaatttaa tgacaaagaa
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6721 tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc
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7081 actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt
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7201 caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa
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7501 agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt
7561 accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga
7621 gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct
7681 tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg
7741 cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca
7801 cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa
7861 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
7921 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
7981 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga
8041 gcgcccaata cgcatgc
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