• pUT-miniTn5 Cm

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• 圖譜Map

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The mini-Tn5 are mobile elements able to transpose to the chromosome from a delivery plasmid, by means of the transposase activity encoded by the tnp* gene, which is present in cis in the plasmid but external to the mini-Tn5 element. pUT mini-Tn5 vectors can be used to insert any DNA fragment in the bacterial chromosome, by cloning it within the mini-Tn5 region. Due to the loss of the tnp* gene after insertion, minitransposons are stably integrated into the chromosome and inherited. The different pUTmini-Tn5 vectors can then be used for repeated insertion events and therefore multiple insertions in the same strain are only limited by the availability of distinct selection markers.

Advantages:

• Easy and stable insertion of heterologous DNA in the chromosome of the strain of interest, after few simple genetic manipulations.

• Wide range of inserted fragment sizes.

• Possibility of multiple insertions in the same strain.

• Easy modification of the cloning vector.

• Use of cleavage sites of the rare cutters NotI and SfiI.

• Wide range of Gram negative recipient strains.

Some of the most common applications of pUTmini-Tn5 vectors are:

• Cloning.

• Insertional mutagenesis.

• Promoter probing.

• Generation of conditional phenotypes and non-polar mutations.

• Analysis of transcriptional terminators.

• Environmental applications: tagging with marker genes for monitoring of released microorganisms and/or transcriptional regulation in the environment.

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• pUT mini-Tn5 Cm kit

  • pUT mini-Tn5 Cm, 2 μg.

  • E. coli DH5a lpir, stab.

  • E. coli S17-1 lpir, stab.

  • E. coli DH5a(pRK2013), stab.

  • TSS solution, 1.5ml.

  
  

  pUT mini-Tn Km kit

  • pUT mini-Tn5 Km, 2 μg.

  • E. coli DH5a lpir, stab.

  • E. coli S17-1 lpir, stab.

  • E. coli DH5a(pRK2073), stab.

  • TSS solution, 1.5ml.

  
  

  pUT mini-Tn Sm/Sp kit

  • pUT mini-Tn5 Sm/Sp, 2 μg.

  • E. coli DH5a lpir, stab.

  • E. coli S17-1 lpir, stab.

  • E. coli DH5a(pRK2013), stab.

  • TSS solution, 1.5ml.

  
  

  pUT mini-Tn Tc kit

  • pUT mini-Tn5 Tc, 2 μg.

  • E. coli DH5a lpir, stab.

  • E. coli S17-1 lpir, stab.

  • E. coli DH5a(pRK2013), stab.

  • TSS solution, 1.5ml.

  
  

  PANC-1 mini-Tn5 package

  • pUT mini-Tn5 Km, 2 μg.

  • pUT mini-Tn5 Cm, 2 μg.

  • pUT mini-Tn5 Sm/Sp, 2 μg.

  • pUT mini-Tn5 Tc, 2 μg.

  
  

  PANC-1plus miniTn5 package

  • pUT mini-Tn5 Km, 2 μg.

  • pUT mini-Tn5 Cm, 2 μg.

  • pUT mini-Tn5 Sm/Sp, 2 μg.

  • pUT mini-Tn5 Tc, 2 μg.

  • E. coli DH5a lpir, stab.

  • E. coli S17-1 lpir, stab.

  • E. coli DH5a(pRK2013), stab.

  • E. coli DH5a(pRK2073), stab.

  • TSS solution, 1.5ml.

  
  

  pUT mini-Tn5Tel kit

  • pUT mini-Tn5Tel vector, 2 μg.

  • Potassium Tellurite, 100mg.

  • E. coli DH5a lpir, stab.

  • E. coli S17-1 lpir, stab.

  • E. coli DH5a(pRK2013), stab.

  • TSS solution, 1.5ml.

  
  

pUT mini-Tn5 vectors

僅用于科研使用

產品簡介

通過位于質粒cis上的tnp*基因編碼的tansposase（轉座酶）的作用，mini-Tn5可被從運載體質粒上轉置到染色體上。pUT mini-Tn5載體，可通過在mini-Tn5區域內進行克隆，從而在細菌染色體內插入任何一段DNA片段。在插入片段后，tnp*基因會缺失。因此，mini-

transposon就會穩定的整合到染色體中，并獲得穩定遺傳。不同的pUT mini-Tn5載體可以用于重復插入片段。因此，要在同一菌體內可實現多次插入，也就只有一個限制因素了，那就是——不同的選擇標志物。

應用

pUT mini-Tn5載體的一些最普遍的應用：

-克隆

-插入突變

-啟動子探測

-條件性表型和非極性突變的建立

-轉錄終止分析

-環境應用：用標記基因標識，監控釋放到環境中的微生物和基因轉錄調控

優點

-通過簡單的遺傳操作，在目標菌株的染色體中，穩定地插入異源DNA

-通過運載質粒的條件復制，實現轉座因子選擇性地整合到染色體上

-可插入片段大小的范圍廣

-可實現在同一菌株細胞內多次插入

-對克隆載體實現輕松修飾

-利用罕見的Hot I和Sfi I酶切位點

-廣泛應用于革蘭氏陰性受體菌

參考文獻

1. De Lorenzo V., Timmis K.N. 1994. Methods in Enzymology, 235, p. 386-405.

2. De Lorenzo V., Herrero M., Sanchez J., Timmis K.N. 1998 Microbiology Ecology, 27, p. 211-224.

3. Herrero M., De Lorenzo v., Tmimis K.N. 1990. Journal of Bacteriology, 172, p. 6557-6567.

pUT mini-Tn5產品

僅用于科研

pUT mini-Tn5 protocol

相關產品

pUT mini-Tn5載體體系

Kits

(*) PANC-1 mini-Tn5 package包含pUT mini-Tn5 Cm, pUT mini-Tn5 Km, pUT mini-Tn5 Sm/Sp 和 pUT mini-Tn5 Tc及載體全序列CD盤。 (**) PANC-1 plus mini-Tn5 package包含pUC16Not, pUC18Sfi, TSS solution, E. coliDH5α λpir, E. coliS17-1 λpir, E. ColiDH5α(pRK2013) 和E. coli DH5α(pRK2073)及載體全序列CD盤。

輔助載體

菌株

引物

pUTmini-Tn5 Cm載體

pUTmini-Tn5 Cm載體，是一個具有8686堿基對的質粒，屬于pUTmini-Tn5衍生載體。該載體包含了在pUT鏈骨架內克隆的迷你轉座子mini-Tn5 Cm。因攜帶有cat基因，所以，pUTmini-Tn5 Cm具有氯霉素抗性。表達框CmR是由Ω interposon (1)衍生而來，兩端是Tn5的I和O末端（末端重復序列），在所有的鏈接有抗性基因的三個閱讀框內，包含了由156-nt反向重復序列組成的T4噬菌體基因的32個轉錄終止密碼子和翻譯終止密碼子(1,2)。

pUT mini-Tn5 Km載體

pUT mini-Tn5 Km載體是一個具有7575堿基對的質粒，屬于pUTmini-Tn5衍生載體。該載體包含了在pUT鏈骨架內克隆的迷你轉座子mini-Tn5 Km。因攜帶卡那霉素抗性基因（KmR)而具有卡那霉素抗性。其兩端是Tn5的I和O末端（末端重復序列）。Mini-Tn5 Km在卡那霉素基因（源于Tn5）左極端處多了一個I末端。表達框具有卡那霉素抗性基因，在所有的鏈接有抗性基因的三個閱讀框內，連接有156-nt組成的T4噬菌體基因的32個轉錄終止密碼子和翻譯終止密碼子(1,2)。

pUTmini-Tn5 Sm/Sp載體

pUTmini-Tn5 Sm/Sp載體具有7386堿基對的質粒，屬于pUTmini-Tn5衍生載體。該載體包含了在pUT鏈骨架內克隆的迷你轉座子mini-Tn5 Sm/Sp。mini-Tn5 Sm/Sp攜帶有性標識——add基因，鏈霉素和壯觀霉素抗性基因。表達框Sm/SpR由interposon衍生而來，兩側有Tn5的I和O末端（末端重復序列），在所有的鏈接有抗性基因的三個閱讀框內，連接有156-nt組成的T4噬菌體基因的32個轉錄終止密碼子和翻譯終止密碼子(1,2)。

pUTmini-Tn5 Tc載體

pUTmini-Tn5 Tc載體是一個具有7477堿基對的質粒，屬于pUTmini-Tn5衍生載體。該載體包含了在pUT鏈骨架內克隆的迷你轉座子mini-Tn5 Tc。mini-Tn5 Tc攜帶有抗性標識——tet基因，四環素抗性基因。表達框TcR由Ω interposon (1)衍生而來，兩端連接有Tn5的I和O末端（末端重復序列）。在所有的鏈接有抗性基因的三個閱讀框內，連接有156-nt組成的T4噬菌體基因的32個轉錄終止密碼子和翻譯終止密碼子(1,2)。

pUTmini-Tn5 Tel載體

pUTmini-Tn5 Tel載體是一個具有8387堿基對的質粒，屬于pUTmini-Tn5衍生載體。該載體包含了在pUT鏈骨架內克隆的迷你轉座子mini-Tn5 Tel。mini-Tn5 Tel，攜帶有選擇性標識——亞碲酸鉀(K2TeO3，有毒化合物)抗性的cassette。該抗性基因(TelR)由Klebsiella aerogenes (1)的質粒RK2中的Tel AB和 kilA基因編碼。TelR位于mini-Tn5迷你轉座子的I和O末端（末端序列）之間。

PANC-1 Mini Tn-5 Package

Kit components (Cat. No. KT-3260)

另有

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