pGRE-luc單熒光素酶信號(hào)通路活性質(zhì)粒
復(fù)制子: pUC
原核抗性: 氨芐青霉素Amp
篩選標(biāo)記: 熒光素酶Luc
克隆菌株: 大腸桿菌DH5α
培養(yǎng)條件: 37℃
質(zhì)粒簡(jiǎn)介
載體 pGRE-Luc 可以用來(lái)檢測(cè) GRE 信號(hào)通路活性。載體 pGRE-Luc 含有螢火蟲(chóng)來(lái)源的熒光 素酶基因。這個(gè)載體也包含多拷貝的 GRE 結(jié)合位點(diǎn)序列，并且該序列和一段 TATA-類似啟 動(dòng)子（PTAL）融合在一起，PTAL 源于單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）啟動(dòng)子。當(dāng)內(nèi)源性 的 GRE 蛋白結(jié)合到 GRE 增強(qiáng)元件時(shí)，轉(zhuǎn)錄起始，報(bào)告基因開(kāi)始表達(dá)。 熒光素酶編碼序列后有一段 SV40 多聚腺苷酸信號(hào)以確保在真核細(xì)胞中能正確有效的轉(zhuǎn)錄。 在 GRE 結(jié)合位點(diǎn)的上游有一段合成的轉(zhuǎn)錄抑制區(qū)（TB），該區(qū)域由多聚腺苷酸信號(hào)與轉(zhuǎn)錄 終止位點(diǎn)組成，以減少轉(zhuǎn)錄背景。該載體骨架也包含了一個(gè) f1 復(fù)制起始區(qū)域以便進(jìn)行單鏈 DNA 的復(fù)制，一個(gè) pUC 復(fù)制起始位點(diǎn)以及一個(gè)氨芐抗性基因，便于進(jìn)行培養(yǎng)篩選。
載體 pGRE-Luc 用來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子 GRE 與 GRE 增強(qiáng)子的作用，提供了直接檢測(cè)這條通路活 性的途徑。該載體可以和一個(gè)目的基因的表達(dá)載體共轉(zhuǎn)來(lái)觀察，其是否影響這條通路的活性。 熒光素酶是一種高敏感性的酶原性報(bào)告蛋白，適用于任何一種標(biāo)準(zhǔn)的熒光素酶檢測(cè)法，可以 用來(lái)定量表達(dá)水平。pGRE-Luc 載體可以用任何一種標(biāo)準(zhǔn)的方法轉(zhuǎn)染至哺乳動(dòng)物細(xì)胞。為了 篩選穩(wěn)定克隆，轉(zhuǎn)染的載體通常含有抗性篩選基因如：neomycin，hygromycin 或者 puromycin。
合適的宿主系：DH5α 以及一些其他通用系。進(jìn)行單鏈 DNA 的合成宿主菌需要包含一個(gè) F’ episome，比如 JM109。 篩選標(biāo)記：質(zhì)粒為宿主 E.coli 提供了氨芐抗性（100ug/ml） E.coli 復(fù)制起始位點(diǎn)：pUC 拷貝數(shù)：~500 不相容質(zhì)粒:pMB1/ColE1。

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