基因工程菌株ZNW-S11、ZNW-S12和ZNW-S13 BioVector NTCC質粒載體菌種細胞基因保藏中心
以Streptomyces lividans TK24為表達宿主,構建高效表達棘白霉素脫酰酶(EchDA)的基因工程菌。方法:從Actinoplanesutahensis NRRL 12052中獲取EchDA的基因片段,連接到鏈霉菌表達載體pNW-S1,采用誘導型啟動子Plac與組成型啟動子PermE*和PSau3A,依次構建基因工程菌株ZNW-S11、ZNW-S12和ZNW-S13。通過分析啟動子對EchDA分泌表達的影響,確定工程菌的表達能力,隨后完善發酵放大的工藝過程,將工程菌株發酵放大到300 L發酵罐水平。結果:成功實現了EchDA在S.lividans TK24中的誘導分泌表達;在搖瓶水平,EchDA的酶活可達到125U/L,在24h內可實現對15g/L米卡芬凈前體FR901379的完全轉化;在300L發酵罐水平,EchDA的酶活可達到80U/L,可用于10g/LFR901379的完全轉化。當前,國內在工業生產中仍使用原始菌A. utahensis來表達EchDA,而開發的EchDA基因工程菌,與之相比在生產效率上有了大幅度提升,有助于改良當前棘白霉素類抗生素的生產工藝。
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