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釀酒酵母表達載體pGMAK質粒
一種表面展示淀粉酶的重組釀酒酵母及構建方法和應用。該重組釀酒酵母的構建方法為：將淀粉酶基因插入釀酒酵母表達載體pGMAK中GAL1啟動子下游MFα1信號肽與釀酒酵母的細胞壁α凝集素基因之間，構建獲得重組質粒；采用同源重組技術將釀酒酵母的GAL1基因替換為GAL4基因，將所述重組質粒轉入該細胞，獲得重組釀酒酵母。本發明通過同源重組技術獲得了具有雙重GAL4基因的重組釀酒酵母，可有效提高GAL1啟動子表達效率；同時，細胞壁α凝集素能將淀粉酶高密度展示表達在釀酒酵母細胞壁外表面。利用該重組釀酒酵母表面展示淀粉酶，表達效率較高，表達量較大，能獲得較高酶活的淀粉酶，且酵母發酵培養后可直接作為淀粉酶制劑使用。
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