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農桿菌 GV3101菌株/感受態細胞菌株/感受態細胞由NTCC典型培養物保藏中心-BioVector質粒載體菌株細胞基因保藏中心 現貨提供。
GV3101 Chemically Competent Cells 化學感受態細胞產品說明書 產品規格 GV3101 Chemically Competent Cells, 10×200μl 保存條件： -80℃ 基因型 C58 (rif R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR/strepR) Nopaline 產品說明 GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質粒含有篩選標簽：Strep和gent，賦予GV3101菌株鏈霉素和慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作，經pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率可達104cfu/μg。 操作方法 1. 取-80℃保存的農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態時插入冰中。 1. 每100μl感受態加1ug（體積不大于10ul）質粒DNA，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。 3. 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3小時。 4. 6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天（當平板只含有50ug/ml kan 時，28℃培養48h即可；平板中同時加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 時，需28℃培養60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養72-90h）。 注意事項 1. 感受態細胞最好在冰上融化。 2. 混入質粒時應輕柔操作。 3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。 |
備注： 1、農桿菌相關抗生素配方：
2、常用農桿菌抗性：（R：抗；S：敏感。）
3、LB及YEB配方：
注意事項 1、加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10 ；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。 2、混入質粒時應輕柔操作。 3、轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。 4、利福平濃度不應高于25ug/ul，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50ug/ml kan，若所用平板含有20ug/ml rif則轉化效率降低到1/2。 5、培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質粒丟失，但鏈霉素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養農桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質粒丟失的概率極低（可以忽略）。 |
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