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載體基本信息
| 出品公司: | Microbix Biosystems INC |
|---|---|
| 載體名稱: | pDC315 |
| 質粒類型: | 哺乳動物細胞腺病毒表達載體 |
| 高拷貝/低拷貝: | 低拷貝 |
| 啟動子: | MCMV |
| 克隆方法: | 多克隆位點，限制性內切酶 |
| 載體大小: | 3913 bp |
| 5' 測序引物及序列: | pDC315F: acg tgg gta taa gag gcg |
| 3' 測序引物及序列: | pDC315R: cga tgc tag acg atc cag |
| 載體標簽: | -- |
| 載體抗性: | 氨芐 |
| 備注: | pDC315 是一種真核表達質粒載體，將目的基因插入多克隆位點，轉染細胞即可進行表達。帶有目的基因的pDC315 可以通過插入位點兩側的酶切位點以及目的基因內部的特異酶切位點進行鑒定。 |
| 產品目錄號: | PD-01-27 |
| 穩定性: | / |
| 組成型: | -- |
| 病毒/非病毒: | 腺病毒 |
載體質粒圖譜和多克隆位點信息
主要元件位置：
2~102: ITR
469~991: MCMV promoter (short)
1029~1188: SV40 polyA
1190~1223: loxP
1603~1903: ori
2353~3169: amp
3454~453: Ad element
3823~1: ITR
主要酶切位點：
Xba I：455
EcoR I：994
Nhe I：1005
BamH I：1013
Sal I：1024
Acc I：1025
載體簡介
pDC315 含有以下元件：
1． Ampr: 為質粒在E.coli（如DH5α）中擴增提供氨芐抗性（終濃度100μg/ml）。
2． ori：質粒在E.coli 中的復制起點。
3． Ad：Ad 序列，主要由Ad 可以與Ad 基因組質粒發生同源重組。
4． ITR：Ad 反向末端重復序列，是Ad 基因組的包裝識別信號。
5． MCMV：來自小鼠CMV 病毒的啟動子。
6． SV40 polyA：來自SV40 病毒T 抗原的mRNA 加尾信號。
7． loxP：真核重組酶（Cre）的重組識別序列。
通過pDC315 構建重組腺病毒的用戶須知
1． 用戶需向Microbix Biosystems, Inc.公司購買pDC315 質粒，并與Microbix Biosystems, Inc.公司簽訂MTA。
2． 為了確保病毒包裝的目的基因能夠正確表達，用戶需對自己構建的帶有目的基因的pDC315 進行酶切鑒定，并建議進行測序驗證，保證克隆的基因正確。
3． 由于pDC315 本身是一種真核表達載體，轉染細胞即可介導目的基因的表達，因此建議有條件的用戶在完成質粒構建后，將其轉染細胞，通過ELISA、免疫組化或Western 的方法來檢測目的基因的表達，以及檢測目的基因表達后的生理活性。這樣可以進一步增加實驗成功的把握。
載體序列
LOCUS pDC315 3913 bp dsDNA Circular
DEFINITION Puc based lox HCMV shuttle plasmid for Cre-based Ad vector rescue Cummings & Graham, unpublished
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COMMENT VNTREPLTYPE|Plasmid|
COMMENT VNTEXTCHREPL|Bacteria|
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biovector.net/
COMMENT VNTAUTHORNAME|biovector.net|
FEATURES Location/Qualifiers
promoter 469..991
/note="MCMV promoter - Short"
/label=MCMV
misc_feature 1190..1223
/label=loxP
polyA_signal 1029..1188
/label=SV40\PolyA
rep_origin 1603..1903
/label=ori
CDS complement(2353..3169)
/label=amp
misc_feature 3454..453
/label=Ad
CDS 3823..1
/label=ITR
CDS complement(2..102)
/label=ITR
ORIGIN
1 ttcatcaata atatacctta ttttggattg aagccaatat gataatgagg gggtggagtt
61 tgtgacgtgg cgcggggcgt gggaacgggg cgggtgacgt agtagtgtgg cggaagtgtg
121 atgttgcaag tgtggcggaa cacatgtaag cgacggatgt ggcaaaagtg acgtttttgg
181 tgtgcgccgg tgtacacagg aagtgacaat tttcgcgcgg ttttaggcgg atgttgtagt
241 aaatttgggc gtaaccgagt aagatttggc cattttcgcg ggaaaactga ataagaggaa
301 gtgaaatctg aataattttg tgttactcat agcgcgtaat atttgtctag ggccgcgggg
361 actttgaccg tttacgtgga gactcgccca ggtgtttttc tcaggtgttt tccgcgttcc
421 gggtcaaagt tggcgtttta ttattatagt cagntctaga gatatactga gtcattaggg
481 actttccaat gggttttgcc cagtacataa ggtcaatagg ggtgaatcaa caggaaagtc
541 ccattggagc caagtacact gagtcaatag ggactttcca ttgggttttg cccagtacaa
601 aaggtcaata gggggtgagt caatgggttt ttcccattat tggcacgtac ataaggtcaa
661 taggggtgag tcattgggtt tttccagcca tttaattaaa acgccatgta ctttcccacc
721 attgacgtca atgggctatt gaaactaatg caacgtgacc tttaaacggt actttcccat
781 agctgattaa tgggaaagta ccgttctcga gccaatacac gtcaatggga agtgaaaggg
841 cagccaaaac gtaacaccgc cccggttttc ccctggaaat tccatattgg cactcattct
901 attggctgag ctgcgttcta cgtgggtata agaggcgcga ccagcgtcgg taccgtcgca
961 gtcttcggtc tgaccaccgt agaacgcaga tcgaattcaa gctgctagca aggatccagc
1021 ttgtcgactt cgagcaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
1081 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
1141 ctcatcaatg tatcttatca tgtctggatc gtctagcatc gaagatccaa taacttcgta
1201 tagcatacat tatacgaagt tataagtagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct
1261 gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt
1321 aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc
1381 gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg
1441 agaggcggtt tgcgtattgg gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg
1501 gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca
1561 gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac
1621 cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac
1681 aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg
1741 tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac
1801 ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc aatgctcacg ctgtaggtat
1861 ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag
1921 cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac
1981 ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt
2041 gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggt
2101 atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc
2161 aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga
2221 aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac
2281 gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc
2341 cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct
2401 gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca
2461 tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct
2521 ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca
2581 ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc
2641 atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg
2701 cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct
2761 tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa
2821 aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta
2881 tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc
2941 ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg
3001 agttgctctt gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa
3061 gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg
3121 agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc
3181 accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg
3241 gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat
3301 cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata
3361 ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc
3421 atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc actctaggca aaatagcacc ctcccgctcc
3481 agaacaacat acagcgcttc acagcggcag cctaacagtc agccttacca gtaaaaaaga
3541 aaacctatta aaaaaacacc actcgacacg gcaccagctc aatcagtcac agtgtaaaaa
3601 agggccaagt gcagagcgag tatatatagg actaaaaaat gacgtaacgg ttaaagtcca
3661 caaaaaacac ccagaaaacc gcacgcgaac ctacgcccag aaacgaaagc caaaaaaccc
3721 acaacttcct caaatcgtca cttccgtttt cccacgttac gtaacttccc attttaagaa
3781 aactacaatt cccaacacat acaagttact ccgccctaaa acctacgtca cccgccccgt
3841 tcccacgccc cgcgccacgt cacaaactcc accccctcat tatcatattg gcttcaatcc
3901 aaaataaggt ata
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