基于Red同源重組和CRISPR/Cas9的銅綠假單胞菌基因組編輯服務

基于Red同源重組法的銅綠假單胞菌基因組改造

銅綠假單胞菌基因敲除的傳統方法是利用自身的Red系統對外源進入的DNA進行同源重組，從而實現目標基因的等位替換。通過設計靶基因的同源融合片段，將其克隆至自殺載體中，自殺載體通過接合輸入到靶細菌。通過抗生素篩選細菌基因組靶位點整合有自殺載體的插入突變株。在第二輪反向選擇壓力下，只有銅綠假單胞菌基因組發生第二次同源重組并丟失自殺質粒才可以存活。

基于CRISPR/Cas9平臺的銅綠假單胞菌基因組改造

CRISPR/Cas9系統是細菌和古細菌特有的一種天然防御系統,用于抵抗病毒或外源性質粒的侵害。BioVector NTCC Inc.推出CRISPR方法進行銅綠假單胞菌基因組改造服務（包括基因敲除、定點突變、定點插入外源序列等）。相比于傳統的基因敲除方法，該方法速度快，無痕；非常便于后續的實驗研究。

研究內容

• 銅綠假單胞菌基因敲除（Pseudomonas aeruginosa gene knockout）

• 銅綠假單胞菌基因敲入（Pseudomonas aeruginosa gene knockin）

• 銅綠假單胞菌基因點突變（Pseudomonas aeruginosa gene point mutation）

服務優勢

• 無痕編輯

• 多基因編輯：能同時敲除多達3個基因

• 便于篩選：不要求靶細菌具有抗生素抗性

• 周期快：3周交付

• 定制服務：模式菌株或者宿主菌株

• 定制服務：開發特殊物種的基因組編輯系統

客戶提供信息

• 銅綠假單胞菌宿主菌株信息

• 靶基因的ID或靶序列

下游應用

• 抗生素及重要工業用酶

• 發現新的基因功能

• 優化代謝通路，提升代謝產物產量，實現工業化生產

參考文獻：

• Selle K, Barrangou R. Harnessing CRISPR–Cas systems for bacterial genome editing[J]. Trends in microbiology, 2015, 23(4): 225-232.

• Zerbini, F., Zanella, I., Fraccascia, D., K?nig, E., Irene, C., & Frattini, L. F., et al. (2017). Large scale validation of an efficient CRISPR/Cas-based multi gene editing protocol in Escherichia coli. Microbial Cell Factories, 16(1), 68.