T7聚合酶表達質粒載體pcDNA3.1_x001e_RNAP

一種用T7噬菌體RNA聚合酶和T7啟動子系統在哺乳動物細胞表達蛋白的方法，所述方法包括如下步驟：(1)根據哺乳動物細胞偏愛密碼子優化原始T7RNA聚合酶基因序列，在所述基因序列上、下游分別加入酶切位點，并在下游添加SV40T_x001e_Antigen核定位序列；基因合成的T7RNA聚合酶基因序列如SEQ ID NO:1所示；(2)將所述合成的T7RNA聚合酶基因克隆到質粒pUC57中，通過酶切位點連接到pcDNA3.1真核表達載體上，構建得到pcDNA3.1_x001e_RNAP質粒；(3)將待表達基因兩端分別加入T7啟動子，IRES和T7終止子，然后連接到pUC57載體上，構建得到待表達基因的質粒；(4)將步驟(2)和(3)中得到的質粒作為雙質粒共表達系統，以共轉染真核細胞，以及表達蛋白。

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