海洋弧菌基因敲除的自殺質粒

一種弧菌通用的基因敲除自殺載體及其構建方法，并提供了其在弧菌基因敲除中的應用方法?；蚯贸詺⑤d體pLP12，為環狀載體，包括PBAD啟動子、阻遏蛋白基因araC、RP4轉移起始位點、氯霉素抗性基因、R6K復制起始位點、多克隆位點區和致死基因vmi480，所述的多克隆位點區至少包含兩個AhdI酶切位點，自殺載體pLP12經AhdI酶切后形成線性化自殺載體pLP12T。本發明的基因敲除自殺載體中采用了全新的反向選擇基因vmi480，用于替代常用的sacB基因。pLP12T攜帶外源片段通過接合方式轉移到待突變弧菌細胞，在抗生素以及反向選擇致死基因vmi480產物壓力下，弧菌先后發生第一次同源重組和第二次同源重組，最終產生目的基因缺失突變株。

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