CHO-S Cells

Cat No.: NTCC502649

The CHO-S cellline is a stable aneuploid cell line established from the ovary of

an adultChinese hamster (Puck et al., 1958). The CHO-S cells are:

? prepared from low passage Master Cell Bankcultures derived from parental

CHO-S cellsthat were re-cloned by limiting dilution in CD CHO Medium,

and selectedfor their superior serum-free cell growth and transfection

efficiencies(Ciccarone et al., 1999; Schifferli, 1999).

? adapted to serum-free suspension growth.

? manufactured under cGMP guidelines and banked inCD CHO, a serum-free,

protein-free,and chemically defined medium that is formulated with no

components ofanimal or human origin (Gorfien, 1998).

ParentalCell Line

Chinese HamsterOvary (CHO) cells are among the most commonly used cell

lines fortransfection, expression and large-scale production of recombinant

proteins. TheCHO cell line is a stable aneuploid cell line established from the

ovary of anadult Chinese hamster (D'Anna, 1996; D'Anna et al., 1997; Deaven &

Petersen, 1973;Puck et al., 1958).

Typically,CHO-S Cells cultured in CD FortiCHO Medium

have a doublingtime in the range of 17–20 hours; however, doubling time can

exceed 20 hoursduring the first few passages after the cells have been thawed.

Do not allowCHO-S Cells to reach a cell density above 2 × 106

cells/mL beforetransfection, because this may cause a decrease in transfection

efficiency.

CHO-S Cells. 倉鼠卵巢細(xì)胞    【種屬】：  倉鼠    【組織】：   卵巢

CHO-S 細(xì)胞復(fù)蘇

1.37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基（CHO 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基）；

2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C 水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；

3.在超凈臺中加入5ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm 離心5min；

4.棄上清，加入5ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，用血小球計數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，按細(xì)胞密度1×106/ml 接種到125ml

無菌搖瓶中（帶空氣過濾通氣孔的搖瓶）,同時加胎牛血清至終濃度為2%；此后細(xì)胞每傳代一次，血清濃

度降低一半，即2%，1%，0.5%，0.25%，0.125%，0.此時細(xì)胞可無血清培養(yǎng)。

5.搖瓶置于37°C，8% CO2 培養(yǎng)箱中的搖瓶架上，125rpm 培養(yǎng)。

CHO-S 細(xì)胞傳代

1.取細(xì)胞計數(shù)(詳見CHO-S 細(xì)胞凍存)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1.0-3.0×106/ml 時（最好不要超過3.0×106cells/ml），

可傳代；

2.37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基（CHO 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基）；

3.在超凈臺中，加適量預(yù)熱好的培養(yǎng)基到無菌搖瓶中，以細(xì)胞終密度為6-7×105/ml 接種細(xì)胞（也可1000rpm，

5min 離心后棄上清，用預(yù)熱好的培養(yǎng)基重懸并調(diào)整細(xì)胞密度為6-7×105/ml），轉(zhuǎn)移到無菌搖瓶中；

4. 搖瓶置于37°C，8% CO2 的培養(yǎng)箱中的搖瓶架上，125rpm 培養(yǎng)。

注：CHO-S 細(xì)胞對氧的要求較高，因此，懸浮培養(yǎng)必須具有高表面積體積比，否則細(xì)胞的生長會受到抑制。

培養(yǎng)基的體積不能超過搖瓶的五分之二；即100 毫升的搖瓶不能超過40ml 培養(yǎng)基，250ml 搖瓶不能超過

100ml 培養(yǎng)基。

CHO-S 細(xì)胞凍存

1.細(xì)胞計數(shù)：

1)洗凈晾干血小板計數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片完全覆蓋計數(shù)區(qū)

2)充分混勻細(xì)胞，取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺盼藍(lán)混合，移液器吹吸混合均勻，用移液

器取20ul 混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞，以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳

3)顯微鏡下，數(shù)四個計數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù)，無活性細(xì)胞染成藍(lán)色，活細(xì)胞不被染色

4)細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2

這里10000 是不變的，因?yàn)橛嫈?shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm 即10-4cm3 計數(shù)池內(nèi)，25px3=1ml，將

四個計數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)除以4 取平均數(shù)，乘2 是補(bǔ)償加等體積臺盼藍(lán)形成的稀釋。

5)細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%

注:細(xì)胞密度高時，可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺盼藍(lán)的比例，計數(shù)時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。

2.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時，可以凍存細(xì)胞。

3.37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基（CHO 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基）。

4.在超凈臺中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm 離心5min。

5.棄上清，用90%培養(yǎng)液+10%DMSO 的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為5-10×106/ml。

6.將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

7.將裝有細(xì)胞的凍存管放入程序降溫凍存盒，-20°C 放1-2h 后，-80°C 過夜，然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中。

CHO-S 細(xì)胞貼壁培養(yǎng)

1.37°C 水浴預(yù)熱培養(yǎng)基（CHO 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基+10%FBS）；

2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C 水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；

3.在超凈臺中加入5ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm 離心5min；

4.棄上清，加入5ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25 培養(yǎng)瓶中，輕輕晃勻；

5.置于37°C，5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

6.4-6 小時后，用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)；

7.每天觀察細(xì)胞的狀態(tài)和長勢；

8.當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%以上時，給細(xì)胞傳代；

9.在超凈臺中，棄培養(yǎng)基，加入2-5mlPBS 清洗細(xì)胞后，再加入1ml 胰酶消化細(xì)胞；

10.顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開始脫離瓶壁時，加入5ml 培養(yǎng)基（CHO 細(xì)胞無血清培養(yǎng)基+10%FBS）

終止消化；

11.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散；

12.將細(xì)胞移入離心管中，1000rpm 離心5min；

13.棄上清，加入15-20ml 的培養(yǎng)基（含血清）重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T75 培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T25 瓶中（確

保細(xì)胞貼壁后融合度在25-50%之間），細(xì)胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶），混勻細(xì)胞懸液，

確保細(xì)胞均勻分布；

14.將培養(yǎng)瓶置于37°C，5% CO2 的無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。