HiExpress pGP3抗體穩轉表達載體質粒

pGP3是采用著名的GS基因作為選擇基因（Selection Marker）構建的適用于多種哺乳動物細胞的高表達載體。
GS系統是由Lonza首先開發成功的利用GS基因作為篩選標記獲取高表達哺乳動物細胞系的載體系統。該系統的出現解決了經典DHFR系統的缺陷，使得獲得高表達細胞株不是那么難以實現的工作。
GS基因是可催化以glutamate和氨為底物合成谷氨酰胺的過程，methionine sulphoximine (MSX)可特異性抑制該酶的活性。
某些哺乳動物細胞系，例如小鼠NS0，本身不表達GS。因此，如果培養基中不加入谷氨酰胺則細胞不能存活。對這種細胞來說，GS基因可以作為篩選標記。有些細胞，例如CHO K1有內源GS的表達。如果用加入足以完全抑制GS基因表達的MSX且不含谷氨酰胺的培養基培養該細胞，即可造成有效選擇壓力。 二、結構特征：


為使用戶使用方便，研發者給該系統賦予了如下結構特征：
雙表達框：采用雙表達框結構，參照多家國際著名公司用于工業規模生產抗體所用的表達載體的結構，綜合各自的優點，設計了hCMV MIE啟動子驅動的雙表達框；5’-不翻譯區：為提高表達能力，根據國際上對哺乳動物細胞表達機理等的相關研究成果，對上述兩個表達框的5’-不翻譯區進行了改造；對終止信號進行了優選；
一、系統特點： 三、表達系統組成：
該系統主要對5’-端不翻譯區進行了優化，植入了可顯著增強基因表達的調控元件。與DHFR系統相比，有如下優勢：
篩選時重組細胞和非重組細胞對篩選劑MSX的敏感程度比DHFR系統差異明顯，篩選過程中兩類細胞的表現非常“sharp”；
高表達細胞出現比例較高；
本系統篩選周期進一步縮短，一般在6-8周即可獲得高達量超過20pcd的穩轉細胞系（庫）。國際上用該系統開發的細胞系有超過100pcd的案例。
如同DHFR系統，GS系統也具有“Amplification”功能，必要時可進行梯度加壓選擇從而通過增加目的片段的拷貝數來提高表達水平。但加壓選擇的在很多情況下不是必須的，即使需要，也不像DHFR系統那樣需要長時間的加壓選擇。
本系統只需從幾千個細胞中即可獲得有中試價值的高表達細胞株，不需要動用流式細胞儀等大型設備。
以制藥工業廣泛使用的CHO-K1或NS0為受體細胞，可以容易地獲得培養基供應、工藝開發等方面的技術支持。與Lonza的GS系統相比，pGP3系列（包括pGP3、pGP3Due和pGP3Con）具有如下優點：
表達潛力更高：
目的基因由強啟動子驅動；
啟動子強度有效平衡；
Kozak、5’-和3’-不翻譯區等進行了優化；
一段很小的5'-不翻譯區優化后具有很高的活性，載體大小只有6.5kb，但Lonza的GS有10kb。
篩選更有效，更“sharp”：
GS基因由一個高度弱化的啟動子驅動，篩選更有效，更“sharp”。 說明書及操作指南研發者20年治療性抗體開發經驗及工業級高表達載體開發經驗的技術支持；pGP3表達載體；pGFPq，帶有GFPq的真核表達載體，可用于轉染和篩選過程的檢測；CHO K1細胞系：本載體系統的受體細胞，可以用于構建高表達細胞株。用戶可根據實際需要選擇以下兩種細胞之一種：                     （1）cGMP Bank記錄的細胞系，或
                    （2）無cGMP Banking記錄的細胞系
四、適用場合
國際上對GS系統的大規模工業應用十分成功，證明該系統是比較理想的大規模生產抗體等高附加值產品的載體系統。
適用于對表達量有較高要求的項目或項目階段，包括需要克級至公斤級生產量的項目直至大規模生產的項目，從新藥的前期研究、中試生產直至大規模生產。對表達量有較高要求的項目或項目階段，包括需要公斤級甚至更大規模量的項目。

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