pLVpro-EF1α慢病毒表達質粒HIV-1 tat非依賴性第三代慢病毒載體

HIV-1 tat非依賴性第三代慢病毒載體
·臨床使用可能 ，將HIV-1來源序列排除到極限 ，提高安全性
·優化了包裝系統，制備高滴度慢病毒粒子
·和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector組合使用可進行P2實驗（注：取決于插入基因）

LVpro Packaging Mix是經過優化的質粒混合物，高效表達慢病毒制備所需要的成分，用于包裝生產高滴度重組慢病毒。將pLVpro慢病毒載體和LVpro包裝質粒混合物共轉染Lenti-X 293T細胞，包裝質粒瞬時表達Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白，這有助于將重組病毒RNA（從pLVpro慢病毒載體轉錄而來）包入完整的病毒粒子中（圖1）。使用這種經過優化的包裝質粒混合物和高效轉染Lenti-X 293T細胞的轉染試劑Trans IT-Virus-GEN（Mirus Bio, Code No. MIR6700）或Trans IT-293（Mirus Bio, Code No. MIR2700），可以獲得高滴度的重組慢病毒，而且在多數情況下，該病毒可用于直接感染靶細胞，而不需要事先進行濃縮處理。

pLVpro vector是tat非依賴性第三代慢病毒載體，其中5’LTR的U3區域被CMV啟動子取代，并且在不影響感染滴度的情況下刪除了包裝信號附近的HIV來源序列。


圖1. 使用LVpro Packaging Mix和Lenti-X 293T cells制備慢病毒。
使用LVpro Packaging Mix和攜帶目標基因的pLVpro慢病毒載體共轉染Lenti-X 293T cells（Step1），產生相應的重組慢病毒基因組RNA轉錄本和病毒包裝蛋白（Step2）。重組病毒RNA基因組上的包裝信號（ψ）被包裝蛋白所識別（Step3），使重組病毒RNA和包裝蛋白相結合，形成病毒核心并被轉運到細胞膜（Step4）。在那里，病毒核心被包含VSV-G包膜蛋白的細胞膜包裹。這樣成熟的具有感染性的病毒粒子從細胞中產生了（Step5），這些病毒粒子會被釋放到培養液中，然后從培養液中回收病毒粒子（Step6）。

雖然用這種試劑盒產生的病毒粒子是具有感染性的，但它們缺少在靶細胞中復制和增殖所必需的七種基因。該試劑盒使用了多種不同的質粒用于表達病毒蛋白，因此除非多次發生低頻重組，否則很難產生具有復制能力的病毒，這樣試劑盒的使用是非常安全的。

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