pLVpro-MSCV-ZsGreen1 Vector慢病毒表達(dá)質(zhì)粒HIV-1 tat非依賴性第三代慢病毒載體

HIV-1 tat非依賴性第三代慢病毒載體
·臨床使用可能 ，將HIV-1來源序列排除到極限 ，提高安全性
·優(yōu)化了包裝系統(tǒng)，制備高滴度慢病毒粒子
·和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector組合使用可進(jìn)行P2實(shí)驗(yàn)（注：取決于插入基因）

LVpro Packaging Mix是經(jīng)過優(yōu)化的質(zhì)粒混合物，高效表達(dá)慢病毒制備所需要的成分，用于包裝生產(chǎn)高滴度重組慢病毒。將pLVpro慢病毒載體和LVpro包裝質(zhì)粒混合物共轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T細(xì)胞，包裝質(zhì)粒瞬時表達(dá)Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白，這有助于將重組病毒RNA（從pLVpro慢病毒載體轉(zhuǎn)錄而來）包入完整的病毒粒子中（圖1）。使用這種經(jīng)過優(yōu)化的包裝質(zhì)粒混合物和高效轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑Trans IT-Virus-GEN（Mirus Bio, Code No. MIR6700）或Trans IT-293（Mirus Bio, Code No. MIR2700），可以獲得高滴度的重組慢病毒，而且在多數(shù)情況下，該病毒可用于直接感染靶細(xì)胞，而不需要事先進(jìn)行濃縮處理。

pLVpro vector是tat非依賴性第三代慢病毒載體，其中5’LTR的U3區(qū)域被CMV啟動子取代，并且在不影響感染滴度的情況下刪除了包裝信號附近的HIV來源序列。


圖1. 使用LVpro Packaging Mix和Lenti-X 293T cells制備慢病毒。
使用LVpro Packaging Mix和攜帶目標(biāo)基因的pLVpro慢病毒載體共轉(zhuǎn)染Lenti-X 293T cells（Step1），產(chǎn)生相應(yīng)的重組慢病毒基因組RNA轉(zhuǎn)錄本和病毒包裝蛋白（Step2）。重組病毒RNA基因組上的包裝信號（ψ）被包裝蛋白所識別（Step3），使重組病毒RNA和包裝蛋白相結(jié)合，形成病毒核心并被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜（Step4）。在那里，病毒核心被包含VSV-G包膜蛋白的細(xì)胞膜包裹。這樣成熟的具有感染性的病毒粒子從細(xì)胞中產(chǎn)生了（Step5），這些病毒粒子會被釋放到培養(yǎng)液中，然后從培養(yǎng)液中回收病毒粒子（Step6）。

雖然用這種試劑盒產(chǎn)生的病毒粒子是具有感染性的，但它們?nèi)鄙僭诎屑?xì)胞中復(fù)制和增殖所必需的七種基因。該試劑盒使用了多種不同的質(zhì)粒用于表達(dá)病毒蛋白，因此除非多次發(fā)生低頻重組，否則很難產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒，這樣試劑盒的使用是非常安全的。

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