INVSc1 Chemically Competent Cells

Cat No.: BioVector-924876

產品規格

BioVector^TMINVSc1 Competent Cells:                                      100μl/支              保存：-80℃（3個月）

pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                              10μl               保存：-80℃（12個月）

Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存：-20℃（12個月）

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存：    4℃（12個月）

基因型

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52

產品說明

BioVector^TMINVSc1菌株是專門用來做重組蛋白表達的宿主酵母，pYES2質粒與BioVector^TM INVSc1酵母配套使用，激活pYES2質粒的GAL1啟動子的轉錄進而啟動下游重組蛋白的表達。BioVector^TM INVSc1為合子型，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BioVector^TM INVSc1細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA，可用SD-URA板進行篩選。BioVector^TM INVSc1感受態細胞經特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，pYES2質粒檢測轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取100 μl冰上融化的BioVector^TM INVSc1感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒2-5 μg，Carrier DNA (95-100℃，5 min，快速冰浴，重復一次) 10 μl，PEG/LiAc 500 μl并吸打幾次混勻，30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。

2. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。

3. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH₂O 400 μl 重懸，離心 30s棄上清。

4. ddH2O 50 μl重懸，涂質粒篩選用：SD-U medium板，29℃培養48-96 h。

注意事項

1. 感受態細胞最好在冰上融化。

2. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3. INVSc1酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。

● 培養基配制

① 質粒篩選用：SD-U medium (1L):

Yeast Nitrogen base 6.7g

葡萄糖20g

Dropout （即 DO Supplement –Ura）適量（按說明書）

補水到1L，調 PH 至 5.8；

Agar 20g(for plates only)

121℃，15 min 高壓滅菌。

② 蛋白誘導用：Induction Medium SD-U (1L):

Yeast Nitrogen base 6.7g

Dropout （即 DO Supplement –Ura） 適量（按說明書）

補水到800ml，調 PH 至 5.8，121℃，15 min 高壓滅菌；

待培養基溫度降到55℃時，加入已過濾的 carbon source：100 ml 20% 半乳糖，100 ml 10% 棉子糖。