R5421 Yeast strain/Competent cells K+/鉀離子缺陷型酵母菌株/感受態細胞

BioVector's R5421釀酒酵母菌株為K+/鉀離子缺陷型菌株，在文獻中也稱為CY162，多用于K+/鉀離子轉運蛋白的鑒定試驗。

產品規格：

BioVector's R5421 Competent Cells:                                       100μl/支               保存： -80℃（3個月）


BioVector's pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)                           10μl               保存：-80℃（12個月）

Carrier DNA (10 μg/μl)                                             100μl              保存：-20℃（12個月）

PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存：    4℃（12個月）


基因型

MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64




產品說明

BioVector's R5421釀酒酵母菌株為K+/鉀離子缺陷型菌株，在文獻中也稱為BioVector's CY162，MATα型，多用于K+/鉀離子轉運蛋白的鑒定試驗中，也可用于K+/鉀離子通道或鈉鉀離子泵的鑒定試驗。Transformation marker為：ura3，leu2，該菌株可以在含有100mM KCl的培養基中國正常生長，在含有5-10mM KCl的培養基中生長緩慢，當培養基中KCl濃度低于0.5mM，BioVector's R5421（CY162）細胞停止生長。R5421感受態細胞經特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，BioVector's pGADT7質粒檢測轉化效率>103 cfu/μg DNA。





操作方法

1. Carrier DNA 在每次使用前要通過加熱處理使其變性為單鏈狀態，步驟如下：Carrier DNA 放95℃水浴或金屬浴3 min，快速插入冰中，靜置3 min，再次放95℃水浴或金屬浴3 min，快速插入冰中，靜置3 min以上。

2. 取100 μl冰上融化的R5421感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒0.5-3 μg，Carrier DNA10 μl，PEG/LiAc 500 μl并吸打幾次混勻，30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。

3. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。

4. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH2O 400 μl 重懸，離心 30s棄上清。

5. ddH2O 50 μl重懸，涂板，29℃培養48-96 h。





注意事項



1. 感受態細胞最好在冰上融化。

2. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

4. BioVector's R5421酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。

5. 菌落變粉不是污染，是酵母細胞生長中一個常見現象。當細胞在平板培養幾天后，平板上的Adenine被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破壞，Adenine合成途徑受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中間產物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細胞中積累而使菌落變為粉紅色。

6. 酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢，培養基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48 h培養可見直徑1 mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60 h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80 h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養可見直徑1 mm克隆。

Supplier來源:BioVector NTCC Inc.
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