BioVector NTCC典型培養物保藏中心提供大腸桿菌原核可溶性表達載體及菌株

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E.coli大腸桿菌原核可溶性表達比較好的載體請選用如下載體，配套菌株：

pLLP-ompA, pIN-III-ompA，pLLP—STII，pMBP—P，(分泌型表達系列),

pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,易可溶表達

pTrc—CKS 原核可溶性表達載體,CKS融合表達；

pET—DsbA 原核可溶性表達載體，DsbA融合表達；

pMBP—C 胞內可溶性表達；

pET—Trx 硫氧還蛋白融合表達促進蛋白正確折疊

pTrxFus, 配套GI724菌株或GI698菌株

配套可溶表達比較好的菌株(trxB/gor突變型，促進二硫鍵形成和蛋白折疊)：

BL21TrxB(DE3)

BL21TrxB(DE3)plysS

Origami(DE3)
Origami(DE3)pLysS

Origami 2(DE3)
Origami 2(DE3)pLysS

Origami B(DE3)
Origami B(DE3)pLysS

Rosetta-gami(DE3)
Rosetta-gami(DE3)pLysS

Rosetta-gami 2(DE3)
Rosetta-gami 2(DE3)pLysS

Rosetta-gami B(DE3)
Rosetta-gami B(DE3)pLysS

pLLP—OmpA表達載體采用E.coli強啟動lpp和OmpA分泌信號肽，同時在C端添加了6個His可采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。該表達載體成功地實現過人生長激素的基因工程工業化。經多年臨床驗證，分泌型重組人生長激素臨床副反應大大低于包涵體型的重組人生長激素。

pLLP—STII表達載體采用E.coli強啟動lpp和STII分泌信號肽，同時在C端添加了6個His便于采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。STII信號肽引導能力強且易于被E.coli信號肽酶切割。即使第一個氨基酸是半胱胺酸的干擾素也可以實現分泌表達。

pMBP—P表達載體采用E.colitac啟動子和分泌型麥芽糖結合蛋白（maltose binding protein）同時選用凝血酶切割位點并在C端添加6個His便于采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。該表達系統在Medline里有大量的背景文獻參考。它通過MBP引導分泌，可以實現許多基因在周質空間里正確折疊，如TPO（1-153aa）、GM—CSF、IL—2等。我們采用這一表達系統配合固相化的凝血酶成功地獲得了正確折疊的rhGM—CSF，臨床試用表明其副反應比包涵體型rhGM—CSF大大降低。該表達載體表達的蛋白還可通過Amylose親和層析。

pMBP—C表達載體采用E.coli tac啟動子和胞內可溶性麥芽糖結合蛋白（maltose binding protein），同時選用凝血酶切割位點并在C端添加6個His便于采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。該表達系統在Medline里有大量背景文獻參考。它通過MBP胞內融合表達，表達產物可占菌體的20%—30%，可形成可溶性蛋白，也可形成包涵體。融合蛋白還可以通過Amylose親和層析純化。

pET—GST表達載體采用T7啟動子和GST融合表達，同時選用人鼻病毒14亞型3C蛋白酶專一性切割位點。本公司有高純度的重組人鼻病毒14亞型3C蛋白酶出售，同時還有專一性吸附該蛋白酶的樹脂出售。此外，C端還添加了6個His，便于采用chelating sepharose親和層析。本載體表達的融合蛋白可采用吸附GST的親和層析和6個His的chelating sepharose雙重親和層析，極大地方便了下游純化。GST融合表達背景文獻在medline里極為豐富，有數百個基因采用GST融合表達成功。

pET—Trx表達載體采用蛋白質工程改造的硫氧還蛋白即將其中兩個氨基酸突變成His，使硫氧還蛋白在空間立體結構上形成三個組氨酸位點（His-patch），便于采用chelating sepharose親和層析。該表達載體采用T7啟動子和（His-patch）Thioredoxin融合表達，同時選用人鼻病毒14亞型3C蛋白酶專一性切割位點。硫氧還蛋白作為分子內伴侶可以幫助許多基因在E.coli胞內正確折疊如IL—3、IL—6、IL—11等。

pET—His表達載體采用N端6個His和T7啟動子。高效表達產物的N端具備6個His，便于采用chelating sepharose 親和層析純化目標蛋白。同時該載體選用了凝血酶專一性切割切點。融合蛋白既可以采用高純度限制級的凍干凝血酶液體切割，也可以采用固相化凝血酶切割。

pTrc—CKS表達載體采用E.coliTrc啟動子和蛋白質工程改造過CKS(CTP:CMP-3-deoxy-D-manno-octulosonate cytidylyltransferase or CMP-KDOsynthetase)基因融合表達，同時選用人鼻病毒14亞型3C蛋白酶專一性切割位點。CKS融合表達是美國Abbot公司的專利，CKS融合蛋白研制成功HIV和HCV重組抗原并取得FDA認證在美國上市。CKS是一個非常穩定且高度可溶的理想融合伴侶。本發明除去掉CKS C端8個氨基酸外，還將C端Met突變成Thr，一方面可報自已的專利，另一方面有利于基因表達。

pET—DsbA表達載體采用T7啟動子和DsbA基因融合表達，同時選用凝血酶切割位點。DsbA是近年來發現幫助二硫鍵形成的重要分子內伴侶之一。本試劑盒DsbA基因去掉了信號肽，同時將DsbA氧化還原功能相關的兩個半胱氨酸（cys）突變成絲氨酸（ser），這樣與突變后的DsbA融合可實現許多基因的胞內可溶性有活性的高表達（表達量大于30%），如IGF—1、IGFBP、EGF、Insulin等。

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