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pYSEAP plasmid
pYSEAP分泌型堿性磷酸酶報告載體, 帶有EF1alpha啟動子,SEAP分泌型堿性磷酸酶報告基因可做發光檢測,帶有Blasticidin殺稻瘟菌素真核篩選抗性標記.
分泌型堿性磷酸酶(SEAP):SEAP是人胎盤堿性磷酸酶的突變體,無內源性表達。SEAP缺乏胎盤堿性磷酸酶羧基末端 的24個氨基酸。其優點是無需裂解細胞,只用培養介質即可檢測酶活性,便于進行時效反應試驗。以間硝基苯磷酸鹽(PNPP) 為底物時可用標準的比色法測定酶活性,操作簡單,反應時間短,價格廉價,但靈敏度低。以黃素腺嘌呤二核苷酸磷酸 為底物進行比色測定,其靈敏度增高。SEAP可催化D—熒光素—O—磷酸鹽水解生成D—熒光素,后者又可作為熒光素 酶的底物,此即兩步生物發光法檢測酶活性的原理。此方法靈敏度高,接近于熒光素酶報告基因的檢測。還可用一步化學 發光法檢測酶活性。
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